[目的]本文旨在明确含Cyt-b5类血红素/类固醇结合结构域（Cyt-b5D）显色片段的最佳长度及其与原核表达载体的普适性,并筛出有效的可视化标签,以期提高载体构建的效率和便捷性。[方法]分析二化螟Cyt-b5蛋白结构域,将其划分成含Cyt-b5D的不同长度片段（OA、OB、OC等）,并分别与3种原核表达载体pET-28a（+）、pET-41a（+）和pET-30a（+）进行连接和异源表达;将筛选的显色片段与二化螟RDL1基因融合表达,比较不同表达时间菌液的显色反应和吸光值;用亲和层析法纯化显色片段表达以及与RDL1表达的融合蛋白,然后进行Westernblot检测。[结果]OA片段是最佳的显色片段,在3种原核表达载体中均可表达出红色的蛋白,且与RDL1融合表达时显色稳定,表明其具有普适性。在420nm波长下的特征吸收峰可用于实时监测显色菌液的生长状态,而层析柱中的红色变化可用于判断蛋白纯化过程。此外,利用Westernblot可检测到目的蛋白,表明显色片段的存在并未干扰目的蛋白的准确鉴定。[结论]Cyt-b5显色片段（OA）可作为原核表达系统的可视化标签,为蛋白表达和纯化等试验操作提供指示标记,从而提高其操作的便捷性和时效性。