实验目的:评价自制实时定量PCR试剂在基因扩增效率上与商品化的差异,同时优化试剂配方,保证其稳定性。实验方法:1.原核表达纯化TaqDNA聚合酶,PCR确定纯化TaqDNA聚合酶的活性及在实时定量PCR中的使用浓度。2.自制实时定量PCR试剂,加入适当浓度的EvaGreen,以pAAV-LacZ质粒为模板,CMV为引物,进行实时定量聚合酶链反应,根据Ct值的变化,琼脂糖凝胶电泳,扩增曲线,溶解曲线来评估反应的灵敏度及特异性。3.调整自制的Real-timePCRmix中甘油,BSA等的浓度,在保证实时定量PCR结果准确性的情况下,尽可能的保证TaqDNA聚合酶的活性。