目的：探讨非小细胞肺癌患者检测肺癌组织细胞角蛋白5/6（CK5/6）、P63基因（P63）、甲状腺转录因子-1（TTF-1）、胃酶样天冬氨酸蛋白酶（NapsinA）对于临床疾病鉴别诊断的价值。方法：选取本院2018年1月至2022年2月收治的88例非小细胞肺癌患者为研究对象，根据临床病理诊断结果划分为鳞癌组25例和腺癌组63例，两组均利用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法进行检测，以病理诊断结果为金标准，统计两组患者相应指标检出率，比较鳞癌组与腺癌组患者各项指标阳性检出情况，比较两组患者不同指标检测与联合检测的灵敏度、特异度差异。结果：免疫组化检测结果显示，TTF-1、NapsinA检出率高于CK5/6、P63，且TTF-1、NapsinA检出率与病理诊断结果比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。鳞癌组患者CK5/6、P63阳性率高于腺癌组，TTF-1、NapsinA阳性率低于腺癌组，组间比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。四项指标联合检验鳞癌、腺癌疾病灵敏度、特异度均高于单一指标检测，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论：临床可通过CK5/6、P63、TTF-1、NapsinA鉴别检验非小细胞肺癌，具有较高的准确率，能够提供可靠数据支持，倡导运用推广。