目的：基于DNA条形码、多重PCR、荧光定量PCR对市售九香虫、小皱蝽及其掺杂样品进行鉴定。方法：利用通用引物COI进行扩增并测序，构建NJ系统发育树、二级结构并计算种内种间遗传距离；基于COI序列设计九香虫、小皱蝽特异性引物并进行电泳，比较电泳条带；基于COI引物进行SBYR荧光定量PCR，观察单一样品及不同比例混合样品的熔解曲线及其Tm值。结果：利用MEGA11.0软件分析显示九香虫、小皱蝽分别单独聚为一支，其种间遗传距离均大于0.22，种内遗传距离均小于0.02；两者的二级结构在整体框架具有明显不同。基于特异性引物扩增的九香虫、小皱蝽均出现单一条带，不同比例的混合样品与混合引物进行扩增均出现2条条带。基于COI引物扩增的九香虫、小皱蝽熔解曲线Tm值分别为75℃、89℃，不同比例混合样品的熔解曲线Tm值分别在75.00℃、89.00℃出现两个峰值。结论：DNA条形码能够及二级结构准确鉴定九香虫、小皱蝽；多重PCR及基于SBYR荧光定量PCR不仅能够准确对单一九香虫、小皱蝽进行鉴定，也能够对不同比例的混合样品进行准确鉴定。